### 人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2培养指南

尊龙凯时为您提供专业的人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2的培养说明，以确保您在实验室中有效地培养和处理此类细胞。

#### 一、细胞培养条件

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：第一次建议1:2进行传代。每两天更换培养基。

提醒：在使用无菌离心管收集培养基时，建议留作对比培养的过渡样本。如果对比效果不理想，推荐直接购买尊龙凯时提供的完全培养基。

#### 二、细胞处理流程

收到细胞后，请尽快培养至良好状态，填满完全培养液并封好瓶口，以确保运输过程中细胞的活性。

收细胞时，先用75%酒精喷洒消毒瓶子，然后将其放置于超净工作台内进行严格的无菌操作。接着，把细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。使用显微镜观察细胞生长情况，并记录不同倍数的拍照保存（建议记录40x、100x、200x各一张），前三天的记录为重要售后依据，若未提供照片则默认收到的细胞状态良好。

#### 三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：当细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，留出5ml培养基于37℃、5% CO2环境中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，并置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态后，若细胞已脱落，加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落，吸出悬液并转移至离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，添加1-2ml培养基重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放回37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存：当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，按以下步骤进行冻存：

1. 弃去培养液，用PBS洗涤细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞基质收缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打使细胞脱落，然后离心收集。
3. 弃去上清，加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 冻存细胞直接置于-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上。

c. 细胞复苏：复苏程序如下：

1. 从液氮中取出冻存管后迅速置于37℃水浴中解冻，确保管中无冰晶后用75%酒精消毒。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，再用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2培养箱中。
4. 次日更换新鲜完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

请注意，有些细胞在运输过程中可能会脱落，这是正常现象。如遇此情况，可通过收集培养液并进行离心的方式处理。：

1. 收集培养液至离心管中，1000RPM离心5分钟并收集上清作对比培养。
2. 加入胰酶并轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后终止反应。
3. 再离心后，重悬并按比例进行传代。

#### 五、售后条款

若细胞出现问题，尊龙凯时可提供重发服务，具体情况包括：

1. 细胞运输过程中发生的问题，如细胞丢失、瓶身破损等。
2. 细胞污染问题须在48小时内反馈真实实验结果。
3. 未提供前3天照片，或收到细胞后未及时告知，也可能影响售后服务。

而对因客户自身操作不当、非推荐培养体系等原因导致的问题，尊龙凯时将不予重发。

感谢您选择尊龙凯时，我们期待为您提供优质的细胞培养服务与支持。