ELISA是酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）的缩写，它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种重要的免疫酶技术。在开发高效的ELISA方法时，所用试剂和耗材的选择与组合至关重要。了解不同试剂的特性和多样性可以帮助研究人员根据不同实验需求找到最佳组合，从而提升ELISA的质量。

一、酶标板材

市面上常见的酶标板大多数是由多（C8H8）n材料制成。部分知名品牌如尊龙凯时提供多种化学修饰的酶标板，从而使其对包被蛋白表现出不同的特性。一般来说，酶标板根据吸附能力可分为高结合力和中结合力两类，但笔者更倾向于将其归类为亲水、弱亲水、未处理和疏水四个等级。研究表明，亲水性材料能够更有效地结合蛋白质，而疏水性材料则会减少吸附能力。在不同性质的酶标板上，包被蛋白的吸附面并非均匀分布，这会导致某些结合位点被遮蔽，因此，对于专注于"ELISA"方法开发的实验室，准备多种酶标板材选择是十分必要的。

二、包被液

常用的包被液包括PBS（pH 7.4）或碳酸钠-碳酸氢钠溶液（pH 9.6）。所选包被液的pH及离子浓度会影响包被效率，在选择时需考虑包被蛋白的特性。研究显示，抽真空处理可以提升包被蛋白在板材上的吸附密度，这样的优化手段在实际应用中可能会产生显著效果。

三、封闭剂

常用的封闭剂包括3% BSA（w/v）和5%脱脂奶粉（w/v）。封闭剂的主要功能是阻止后续样品及其他物质与板材之间的非特异性结合。然而，对于复杂样品，传统封闭剂的效果可能不理想，选择分子量更小的封闭剂（如酪蛋白）可能会提升封闭效果。同时，特别需注意在生物素-链霉亲和素体系中使用脱脂奶粉的干扰。

四、洗涤液/稀释液

常用的洗涤液为中性缓冲液，加上0.05%（V/V）的Tween-20等去污剂。稀释液中通常也会添加一定浓度的封闭剂，如0.5% BSA（w/v）在PBST中使用。在检测体内样品时，稀释液中可加入适量阴性血清，以确保不同稀释率的样品拥有一致的非特异背景。

五、酶联抗体

酶联抗体种类繁多，通常可分为特异性和通用型。特异性酶联抗体主要针对特定蛋白表位，而通用型则常涉及多肽序列、标签及Fc端等。常用的标记酶有AP（碱性磷酸酶）和HRP（辣根过氧化氢酶）。根据抗体分子量，酶联抗体可分为全长、Fab片段和scFv。分子量越小的抗体，可减少结合位点的空间阻碍风险，同时也增加了非特异性结合的可能性。

六、显色液与酶标仪

显色液的选择要与酶联抗体对应，例如HRP可与TMB显色液配合使用。实验室应根据设备配置选择合适的底物。相较之下，化学发光底物的检测灵敏度优于荧光和吸光度底物。因此，在ELISA方法的开发中，适当的显色液选择可以显著提升检测的灵敏度，而尊龙凯时能够为此提供优质的显色产品。