在现代生物医疗领域中,mRNA技术作为一种革新的平台技术,正被广泛应用于预防性疫苗、治疗性疫苗、肿瘤治疗、免疫治疗、蛋白替代和基因编辑等多个方向。mRNA的体外转录合成不仅能够产生所需的mRNA产物,同时也会包含一些杂质,如反应酶(T7 RNA聚合酶、无机焦磷酸酶)、NTP、DNA模板、盐离子及副产物(如dsRNA和截断RNA片段)。这些杂质的存在会影响mRNA的准确计量、降低蛋白翻译效率并可能引发免疫原性。因此,在体外转录后,通过纯化将目标mRNA从IVT(体外转录)混合物中分离出来,是确保产品安全性和有效性的关键步骤。
传统的mRNA纯化方法包括氯化锂沉淀、磁珠纯化、硫酸铵沉淀和亲和层析等。其中,沉淀法和磁珠法虽然操作相对简单快捷,但由于其处理量较小,通常主要应用于早期研发阶段。在工业生产中,亲和层析被广泛采用,但往往需要专业的纯化设备。为了解决这一问题,尊龙凯时推出了一款轻量级的mRNA亲和层析纯化试剂盒,该试剂盒无需专业的纯化设备,操作简便,仅需30分钟即可完成高纯度目标产物的纯化,且NTP残留量低,纯化后的mRNA适用于各种下游实验。
氯化锂沉淀法原理
氯化锂沉淀法利用锂离子在特定pH下能够减少RNA分子间的同电性排斥,从而使RNA分子聚集形成沉淀。操作步骤包括:将反应后的IVT产物与LiCl溶液混合并在-20°C孵育,随后进行离心以分离RNA沉淀。
磁珠纯化法原理
磁珠纯化法利用Oligo(dT)磁珠或羧基磁珠,通过与带Poly(A)尾的mRNA分子特异性结合,将目标RNA与其他杂质分离。该方法有效去除了蛋白质、盐离子和其他杂质,获取高纯度的mRNA,但需注意磁珠的使用条件以保留mRNA的完整性。
硫酸铵沉淀法原理
硫酸铵沉淀法利用其作为沉淀剂,基于目标mRNA与杂质间的溶解度差异进行选择性沉淀。该方法的高回收率与对DNA模板及dsRNA的去除效果,使其成为IVT体系或后续工艺中快速分离mRNA的理想选择。
亲和层析法原理
亲和层析采用Oligo(dT)柱,通过高盐条件下的电荷屏蔽效应,使得mRNA与Oligo(dT)基团结合,有效捕获mRNA分子,而非目标杂质则无法结合。传统亲和层析需要专业设备,而尊龙凯时的轻量化亲和层析纯化试剂盒可通过离心实现,在30分钟内完成样本纯化,确保高质量且快捷获取mRNA。
综上所述,尊龙凯时所推出的mRNA亲和层析纯化试剂盒为生物医疗领域的mRNA纯化提供了新的解决方案,适应了不同起始量的RNA样品需求,无需特殊设备,操作简单,具有优秀的纯化效果和显著的成本效益,充分满足各种实验需要。