尊龙凯时推出的猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）旨在为猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus, CSFV）的检测提供支持。这款试剂盒的英文名称为 Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus (ELISA)。产品包装规格包括96T×1/盒、96T×2/盒及96T×5/盒。

预期用途

猪瘟是一种由猪瘟病毒引起的高度接触性、出血性和致死性的传染病，常表现为高热、广泛出血、坏死和梗塞。该试剂盒用于检测猪血清中是否含有猪瘟病毒抗体，可有效评估猪瘟病毒疫苗的免疫效果。

检测原理

本试剂盒包含预包被猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂，采用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清与血浆中的抗体。在实验过程中，若样品中存在猪瘟病毒抗体，将与酶标板上的抗原结合，经洗涤去除未结合成分后，再加入酶标记物与复合体反应，随后用底物液反应生成蓝色产物。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光值，判断样品是否含有抗体。

储存与有效期

试剂盒需在2～8℃环境中保存，有效期为12个月。开封后的包被板应避免潮湿，需在2℃至8℃处避光存放，使用期限为2个月。

适用设备

该试剂盒适用于配备450nm与630nm波长的酶标仪、37℃恒温设备和可调微量移液器的实验室环境。

样品准备

1. 采用常规方法从动物全血中制备清亮、无溶血和污染的血清，样品应在2℃至8℃下保存，最长可保存至-20℃。
2. 使用样品稀释液，将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl稀释液中混匀），阴性和阳性对照不需稀释。
3. 采用的浓缩洗涤液需恢复至室温，然后用蒸馏水或去离子水进行20倍的稀释，制成工作洗涤液（如19份水加1份浓缩洗涤液）。

检验方法

1. 在使用前将试剂盒置室温30分钟，并恢复至室温。
2. 取所需的酶标板条，设置阴性/阳性对照各2孔，未用的板条应密封并存放于2～8℃。
3. 阴性和阳性对照孔添加各100μl对照液，样品孔每孔加入100μl稀释后的样品。
4. 混匀后盖好盖板膜，在37℃（推荐使用水浴）避光反应30分钟。
5. 弃去孔内液体，加入350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。
6. 每孔加入100μl酶标记物，盖好盖板膜，在37℃下避光反应30分钟。
7. 重复洗涤步骤5。
8. 每孔依次加入底物液A与B各50μl，混匀后盖好盖板膜，在37℃避光反应10分钟。
9. 最后加入50μl终止液，混匀后在450nm（可用630nm作参比波长）测定各孔的吸光值。

参考值

在正常实验情况下，阴性对照的平均OD值应≤0.3，阳性对照的平均OD值应≥0.6。

结果判定

1. 样品的OD值记为ODS；
2. 计算阈值：SP值 = (ODS - ODNC) / (ODPC - ODNC)；SP值≥0.2判定为阳性，SP值＜0.2判定为阴性。
3. 如果实验结果为阴性，表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

试验方法的局限性

该试验主要用于定性检测猪血清及血浆中的猪瘟病毒抗体，通过SP值的高低可粗略评估抗体水平的强弱。

注意事项

1. 实验操作时需佩戴手套和工作衣，并严格遵循消毒隔离制度，所有实验废弃物需按传染物处理。
2. 终止液具腐蚀性，避免接触皮肤和衣物，若不慎接触应立即用大量自来水冲洗。
3. 酶标板应在室温下开袋，未用完的板须存放于含干燥剂的密封袋中。
4. 浓缩洗涤液在低温时易结晶，使用前需恢复至室温以完全溶解。
5. 洗涤时需确保各孔均加满液体，避免孔口有游离酶未被洗净。
6. 用于检测的样品应保持新鲜。
7. 检测结果的判定须以酶标仪读数为准。
8. 不同批号的试剂组分不得混用。

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