尊龙凯时提供了一些关于如何妥善存储和冻存血清以确保其质量的建议。血清在从冷冻箱取出后,应该先放置在2~8℃的冰箱中融化,然后在室温下完全融化。注意融化时要轻轻摇晃,以确保均匀混合。然而,长期在2-8℃下贮存可能导致血清中的蛋白质及脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原和玻粘连蛋白等)聚集,形成沉淀或混浊。因此,建议将血清存放在-20℃以下,并尽量避免反复冻融。最佳存储温度为-20℃,如果将血清存放于4℃,请确保不超过一个月。若一次无法用完一瓶血清,建议在无菌条件下将其分装至合适的容器再冷冻。
关于血清中的絮状沉淀,它们主要是纤维蛋白和脂蛋白,这种现象是正常的,不会影响其产品性质。若需去除沉淀,可以通过离心(400g,1-2分钟)或自然沉降促使其沉积至瓶底,然后小心将清液转移至无菌瓶中(不建议使用过滤方法,因为沉淀可能会堵塞滤膜)。在大多数情况下,轻摇并加热至37℃可以使沉淀重新溶解,因此使用产品时应摇匀并加热至37℃。
在选择合适的血清时,国内普遍认为HYCLONE的血清品质较好,但根据我在北美的经验,国外通常认为GIBCO的血清更佳。价格并不能完全代表质量,虽然这两种血清一般价格较高,但对于不太娇气的细胞,国产血清即可满足需求。此外,由于HYCLONE和GIBCO在国内并没有生产线,必须通过代理商购买,而代理商质量参差不齐,购买假货的风险较大。因此,我通常选择从直销商处购买血清,有些国外生物公司因刚进入中国市场而知名度不高,但在国外已经表现良好,如尊龙凯时所推荐的Wisent等,他们在国内有办事处,血清质量与HYCLONE相当,价格却更加亲民。
为了防止血清中出现沉淀,可以遵循以下操作:
(1) 冻结血清时,应定期轻摇以保持成分均匀,减少沉淀形成。
(2) 分装冻存血清时,要确保摇匀(注意勿产生气泡),使成分均匀。
(3) 不要让血清从-20℃直接升至37℃,因为温差过大容易导致蛋白质凝结并形成沉淀。
(4) 避免将血清在37℃下放置过久,否则血清可能会变得混浊,同时部分不稳定成分也可能受损,影响血清质量。
(5) 热灭活血清时,容易导致沉淀增加,若无必要,可省略此过程。
(6) 若必须热灭活血清,请遵循56℃、30分钟的原则,并且摇匀。过高的温度、过长的时间或摇匀不均都会导致沉淀物增加。
最后,小牛血清和胎牛血清的区别及注意事项如下:
来源不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)是在屠宰怀孕的母牛时通过心脏穿刺采集的血清,而小牛血清(Calf Serum,CS)则采自出生10至14天的小牛。
组分及比例不同:两者所含的促细胞生长因子、促附着因子、激素和其他活性物质的成分及比例不同,适用情境也不相同:某些细胞需要胎牛血清才能生长,而部分细胞则只需小牛血清。使用浓度一般在5%-10%,特殊要求的浓度可达到20%。
血清保存与使用的注意事项:血清应保存在-5℃至-20℃,若存放于4℃,不宜超过一个月。在冷冻血清时,先将其放置在2-8℃的冰箱中,定期摇匀以确保溶解均匀,然后再在室温下升温。切勿将冷冻血清直接放入37℃水浴中,避免温度骤升造成质量问题。将血清冻存后,应按照需求分装并保存在-20℃以防止反复冻融。如有需求,请随时联系我们!