尊龙凯时的β干扰素(IFN-β)ELISA试剂盒使用说明,仅供科研用途,不得用于医学诊断。
试剂盒原理
本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)。在预先包被的抗体微孔中,首先依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤后,添加底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转变成蓝色,随后在酸性环境中转变为最终的黄色,其颜色强度与样品中的adropin(AD)浓度呈正相关。最终通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),以计算样品浓度。
样品收集与处理
1. 血清:使用不含热源和内毒素的试管,避免细胞刺激,采血后以3000转离心10分钟分离血清。
2. 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:以3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织与适量生理盐水捣碎,3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如未即刻检测,样本应分装存放于-20℃,避免反复冻融,并在室温下均匀解冻。
所需设备
1. 酶标仪(450nm)
2. 高精度加样器及枪头:05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒应存放于2-8℃,使用前在室温下平衡20分钟,注意加热溶解可能结晶的洗涤液。
2. 不再使用的板条应立即放回自封袋中并密封保存。
3. S0号标准品可作为阴性对照;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,需乘以5计算实际浓度。
4. 严格遵循说明书中的时间、加液量及顺序。
5. 所有液体组分使用前需充分摇匀。
试剂盒组成
本试剂盒提供96孔和48孔两种配置,包括微孔酶标板、标准品、样本稀释液、检测抗体、洗涤缓冲液、底物和终止液等材料,具体规格详见说明书。
试剂准备
20×洗涤缓冲液需按1:20的比例稀释,使用蒸馏水进行配置。
洗板方法
1. 手工洗板:甩干孔内液体,逐孔加入洗涤液,静置1分钟后甩干,重复5次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液,浸泡1分钟, wash 5次。
操作步骤
1. 从袋中取出所需板条,剩余部分密封于4℃保存。
2. 设置标准品和样本孔,分别加入不同浓度的标准品50μL及待测样本10μL(样本稀释液40μL)。空白孔不加。
3. 向标准品孔和样本孔加入HRP标记的检测抗体100μL,封板膜,37℃水浴孵育60分钟。
4. 洗板后每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15分钟。
5. 添加终止液50μL,15分钟内在450nm测定各孔的OD值。
结果判断
在Excel中绘制标准曲线,以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标,计算样本浓度。
试剂盒性能
1. 准确性:标准品线性回归相关系数R值≥0.9900。
2. 灵敏度:最低检测浓度小于10pg/mL。
3. 特异性:不与其他可溶性结构交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:保持在2-8℃,避光防潮。
6. 有效期:6个月。
免责声明
本试剂盒仅供研究用途,不可用于临床实验,使用者需自行承担后果,尊龙凯时不承担任何责任。请严格按说明书操作,若违反操作规程,后果自行承担。